Práctica de laboratorio: Digestión de nutrientes (amilasa salival)

EXPLICACIÓN
Una de las funciones fundamentales del aparto digestivo es transformar los alimentos ingeridos en estructuras sencillas capaces de ser absorbidas a nivel intestinal. La digestión de carbohidratos ingeridos (como es el caso del almidón) comienza en la boca a través de la ptialina (amilasa). Los productos de esta digestión en la boca son maltosa e isomaltosa y otros polímeros que contienen de 3 a 9 moléculas de glucosa. Aunque el alimento permanece en la boca un corto período de tiempo, la acción de la amilasa salivar continúa hasta que el pH ácido del contenido estomacal la inactiva, de manera que hasta ese momento la enzima hidroliza de un 30 a un 40% de los almidones de la dieta. A nivel intestinal actúa otra α-amilasa de origen pancreático y con una actividad semejante a la salival, rindiendo productos de degradación similares. Estos productos sufren finalmente la acción de otras carbohidrolasas (maltasa, lactasa, isomaltasa) liberando los monosacáridos que posteriormente son absorbidos.

OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es determinar cualitativamente la actividad de la α-amilasa salival (ptialina).

MATERIALES Y REACTIVOS
- Baño termostatizado
- Tubos de ensayo
- Baño a 100ºC
- Papel de filtro
- Embudo
- Pipetas
- Solución de almidón al 0,2% (preparar en agua destilada calentando)
- Solución de lugol (comercial)
o 16,6 g IK
o 1,25 g I2
o c.s.p. 1000 mL agua destilada
- Fehling A: 17,34 g CuSO4/100 mL agua (comercial)
- Fehling B: (comercial)
o 173 g Tartrato sódico potásico
o 50 g de NaOH
o c.s.p. 500 mL agua

PROCEDIMENTO
El almidón es el polisacárido de reserva más abundante en los vegetales. Esta formado por α-amilosa y por amilopectina. La α-amilosa en agua presenta una ordenación espiral característica, en cuyo interior se incluye el yodo, formando un complejo de intenso color azul que permite la identificación positiva de trazas de almidón. La amilasa salival actúa sobre el almidón de los alimentos liberando azucares reductores. Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir cobre (de ión Cu 2+ a ión Cu+), que pasaría de un color azul al rojo. Por otro lado, en medio fuertemente básico, el ión Cu2+ formaría Cu(OH)2 insoluble, por ello se añade tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con
el Cu2+.

PROTOCOLO
a) Disponer en una gradilla de 4 tubos numerados del 1 al 4, colocando en
cada uno de ellos 2 mL de solución de almidón al 0,2%.
b) Tubo 1: añadir 3-4 gotas de solución diluida de Lugol (una parte de lugol
y dos de agua). Anotar el resultado
c) Añadir al tubo 2, 1 mL de solución Fehling A y otro de Felhing B.
Calentar a 100 ºC y anotar el resultado.
d) Agregar a los tubos 3 y 4, una pequeña cantidad (0,5 ml) de saliva. Para
ello tras enjuagar la boca, se mastica un trozo de filtro para estimular la
salivación. La saliva se recoge en un tubo Falcon (pequeño). Incubar los
tubos 3 y 4 durante 15-20 min en un baño a 35-40º C. Transcurrido ese
tiempo se sacan del baño y se dejan enfriar.
e) Añadir al tubo 3, 3-4 gotas de solución diluida de Lugol y observar el
resultado.
f) Añadir al tubo 4, 1 mL de Fehling A y 1 mL de Fehling B. Calentar a 100
º C y observar el resultado.

PRESENTACIÓN DE RESULTADOS:
Observaremos los resultados obtenidos en los 4 tubos y analizaremos el por qué de dichos resultados:
- Tubo I …………………………………………………………………………..
- Tubo II ………………………………………………………………………….
- Tubo III …………………………………………………………………………
- Tubo IV …………………………………………………………………………